重组C因子(rFC)荧光法 内毒素检测试剂盒

重组C因子(rFC)荧光法内毒素检测试剂盒试 

 

货号：

CTC8106

CTC8103

 

剂盒组分

试剂名称	规格	数量
rFC酶溶液	3 mL/瓶	1瓶
反应缓冲液	2.4 mL/瓶	1瓶
荧光底物	0.6 mL/瓶	1瓶
内毒素标准品	10 EU/瓶	1瓶
无热原水	20 mL/瓶	1瓶
本试剂盒全部试剂可进行48 tests（100 μL/孔/test）的检测。

 

试剂名称	规格	数量
rFC酶溶液	6 mL/瓶	1瓶
反应缓冲液	4.8 mL/瓶	1瓶
荧光底物	1.2 mL/瓶	1瓶
内毒素标准品	10 EU/瓶	1瓶
无热原水	30 mL/瓶	1瓶
本试剂盒全部试剂可进行96 tests（100 μL/孔/test）的检测。

 

保存条件

 

使用冰袋运输，收到后请置于2~8℃条件避光储存，未开启的试剂盒有效期为9个月。内毒素工作标准品溶解后，在不污染的情形下可于2~8℃保存一周；为保证检测结果准确，建议所有试剂现配现用。

 

产品介绍

 

² 背景

 

内毒素是革兰氏阴性细菌细胞壁中的一种成分，是由菌体裂解后释出的毒素，是最为常见的生物热原。如果高剂量的内毒素进入体内会导致严重的热原反应，引起人体发热、休克甚至死亡。而且内毒素相比于细菌更加难以灭活，在制药和医疗器械等领域中需要对产品进行严格的内毒素检测分析，以避免发生热原反应事故。

上个世纪60年代的研究人员发现鲎（马蹄蟹）的血液细胞和变形细胞能够与革兰氏阴性菌内毒素发生凝结，认识到鲎的血液制品能够作为检测内毒素的方法，由此开发出的鲎试剂（LAL）检测内毒素的方法在70年代得到认可，被世界各国广泛采用并认定为法定的细菌内毒素检查方法。LAL包括三种蛋白酶原，在内毒素作用下产生一个级联反应。内毒素首先激活其中的C因子，C因子活化后激活B因子，B因子再将其中的凝固酶原转化为凝固酶，由凝固酶使凝固蛋白原转化为凝固蛋白，产生凝胶，进而通过凝胶的形成来推断样本中的内毒素水平。

  

但是鲎试剂也具有无法克服的缺点，鲎试剂除了能与内毒素发生反应之外，还会与（1-3）-β-D-葡聚糖反应，造成假阳性结果。并且因为使用鲎血液作为原料，其成分复杂，由于地域和季节等差异，不同批次的稳定性成为问题。 加上由于人类活动导致的海洋环境的破坏，鲎数量种群也在不断减少，导致原材料的短缺。而随着人用和动物用的药物制剂及医疗器械需求迅速增长，寻求一个替代LAL检测内毒素的有效方法变得越来越重要。重组C因子内毒素检测试剂盒是一种不含动物制品的LAL替代方案，目前一些国家的药品管理机构如美国FDA等已经许可将其作为内毒素检测的一种替代方法。

 

² 原理

 

鲎C因子是一种丝氨酸蛋白酶原，与内毒素结合后被激活为丝氨酸蛋白酶，C因子是鲎血液凝血级联反应中的第一步，能够首先被内毒素激活并启动下游的级联反应。

重组C因子内毒素检测试剂盒主要由重组C因子和荧光底物等部分组成。重组C因子是以基因重组的方式表达的LAL试剂中的C因子，C因子被内毒素结合激活后切割荧光底物产生游离荧光基团，荧光信号值与C因子被激活的量成正相关，通过检测荧光值并拟合标准曲线，由此计算出样本中内毒素的含量。

 

² 特点及优势

 

重组 C 因子内毒素检测试剂盒检测方法简单，反应快速，避免鲎试剂（LAL）法可能出现的假阳性结果，具有更高的特异性，更好的精密度和准确度，且不依赖于动物源性成分，具有以下特点：

1. 使用荧光测定，为定量检测方法；可准确评估待测样本中内毒素含量水平；

2. 定量范围宽，可适用于不同样本中内毒素的检测；

3. 检测通量高：可进行多个样本的检测，反应时间短；

4. 检测灵敏度好，最低可到0.02 EU/mL；

5. 具有更好的精密度和准确度；

6. 特异性好，无G因子β-葡聚糖假阳性干扰情况；

7. 不依赖于动物源成分，避免试剂来源受限，可稳定且持续提供；

8. 重组表达生产，产品批间一致性较好，避免动物来源成分不稳定问题。

 

常见问题及解决方法

 

常见问题	可能原因	解决方法
样品检测信号值过高	样品内毒素浓度过高	稀释相应倍数后重新检测
	样品中存在干扰成分	通过加标回收试验确认原因，可稀释后重新检测
信号强度过低	探测灵敏度太低	提高仪器灵敏度（增益值）
	参数设置错误	检查运行参数
	试剂失效	检查储存条件和包装情况，可更换新试剂或试剂盒
阴性对照孔信号偏高	可能试剂保存时或稀释中受到污染	检查储存情况和检测操作过程，务必采用无热原移液头和EP管，注意操作规范
标准曲线相关系数r2＜0.98	内毒素工作标准品稀释误差	重新稀释
	加样时标准品孔受到污染	多设立复孔，或重新检测
	5 EU/mL浓度荧光信号值超过仪器检测范围	调整荧光检测灵敏度